兔抗鼠IgG***
***及配制
1、缓冲生理盐水:
( 1) 贮存液: Na2HPO4.12H2O 2.85g
KH2PO4 0.27g
N*** 17.00g
蒸馏水定容至 100ml
4℃保存备用
( 2)应用液: 5ml 贮存液加 95ml 蒸馏水,再加 10%***镁 0.1ml, 当日配制, 12 小时内使用。
2、2%绵羊红细胞:无菌采取绵羊血液,于等量 Alsever 液中可保存 3 周。用前以缓冲液洗 3次,并配成 2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。
3、溶血素:将绵羊红细胞溶血素(效价 1:4000),用应用液做 1:2000 倍稀释(即 1ml 溶血素加 1999ml 应用液)。
4、待测***:新鲜血液室温放置 30min,再 4℃放置 60min,使血块收缩, 4℃离心( 3000r/min)10min,取上清, -20℃保存。
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小牛***和胎牛***有何区别与注意事项?
来源不同:胎牛***(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的***,新生牛(小牛)***(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。
组份与比例不同:两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、***及其他活性物质等组份与比例不同,用途与用法不同:某些细胞必需胎牛***才能生长,而有些细胞只需小牛***即可,使用浓度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。
***保存和使用须注意:***应保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超过一个月。解冻***时 ,应先将***至于2-8℃冰箱,并经常摇匀使之溶解,然后至室温放置使之升温,***不可将冷冻的***直接放入37℃水浴或者温箱中,如放在37℃解冻,颜色加深,粘稠度也会增加,***在解冻和热灭活后,应按用量分装并于-20℃保存,避免反复冻融。
兔抗鼠IgG***
标本要求
1. ***:
室温血液自然凝固10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3.尿液:
用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸***、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。
5.培养细胞:
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融或加入***蛋白萃取***,以使细胞***并放出细胞内成份。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6.***标本:
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或***蛋白萃取***, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
8.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 ***辣根过氧化物酶的(HRP)活性。