猪elisa试剂盒-武汉默沙克

(5) 加0.2M赖氨酸0.25ml，混匀后，置室温2小时。 ﹨0 Y( I* K3 j# M ]

(6) 在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时。

(7) 3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。6 s* w9 j F" v4 N9 R- A ~

(8) 将上述溶液装入透析袋中，对0.15M PH7.4的PB缓冲盐水透析，去除铵离子后(用萘氏试剂检测)，10，000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，分装后，冰冻保存。

3）结果判定：5 l5 y# N% b0 A* V" T2 w5 b. ﹨) B

(1) 定性及效价滴定：用特异性抗原(或抗1体)同酶标记抗1体(或抗免疫球蛋白抗1体)作双向琼脂扩散试验或免疫电泳试验。然后用酶的底物使沉淀弧显色，可初步鉴定其活性。最后以直接ELISA法(或在正式实验系统里)对酶结合物进行滴定( 见本节 (三)工作浓度的选择)。

（1）戊二1醛二步法) M ~0 L l# k! D

1） 原理：戊二1醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二1醛-免疫球蛋白结合物。6 C， Q8 jamp; r" m

2）标记步骤：

(1) 称取HRP25mg溶于1.25％戊二1醛溶液中，于室温静置过夜。5 k* k) F9 F5 V% ﹨

(2) 反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml／1分钟，收集棕色流出液。如体积大于5ml，则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中，缓慢搅拌。: e6 V. j! |， b8 _

(3) 将待标记的抗1体12.5mg用生理盐水稀释至5ml，搅拌下逐滴加入酶溶液中。

(4) 用1M PH9.5碳酸缓冲液0.25ml，继续搅拌3?小时。

做好对照正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，猪elisa试剂盒，可采用羊血1清、兔血1清或BSA等封闭。实验条件的选择在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:（1）　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯1乙烯、聚本乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚本乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。