原装elisa***盒-默沙克(图)

3).丙1酮分级分离：将上清液倒入烧杯并置冰盐浴中，在不断搅拌下，用细滴管沿杯壁加入1倍体积预冷至－15℃的丙1酮，放置片刻，在冰冻离心机中以4000r/min离心15min，弃去沉淀。上清液再加入0.8体积(按原上清液体积)-15℃丙1酮，(操作同上)，静置后，在冰冻离心机中离心收集沉淀。将沉淀溶于少量蒸馏水中，透析除去丙1酮。可得RZ值近于1的酶溶液。

4).精制：将上步酶液适当稀释，滴加1mol/L***锌溶液，使酶液中锌离子浓度为10 -3 mol/L，5 000r/min离心10min，得上清液。再将沉淀用少量蒸馏水洗涤，离心，洗液与清液合并，分装于透析袋内，用水透析除盐，用微孔滤膜过滤，进行真空冰冻干燥(约得20mg)，产品呈米***纤维状松软物，HRP产品的?RZ?值可达3.0左右，置真空干燥器中低温保存。? 3 y; ~/ O3 z Bamp; A1 d

3．工作浓度的选择

　　在***酶技术中，首先要确定的变异因素就是酶标记物的工作浓度。因为酶标记物浓度的很小变化，便可导致试验结果产生很大的波动。另外，由于浓度过高，可使非特异性反应增加，原装elisa***盒，而浓度过低又可影响测定的敏***。因此，正式试验前必须准确滴定其工作浓度。

　　酶标记抗1体的滴定方法是：将抗原(或抗1体)物理吸附于固相载体上，然后将经过一系列稀释的酶标抗1体(或抗Ig抗1体)与吸附在载体上的抗原(或抗1体)起反应，以酶与底物的显色反应程度来确定酶标记抗1体的效价，或称工作浓度。

　其步骤为：先将抗原(或抗1体)用0.05M PH9.6包被缓冲液稀释为10μg／ml左右，于聚本乙烯板孔内加0.1ml，4℃过夜，次日以洗涤缓冲液洗涤3次。酶标记抗1体用1％BSA-PBS液依次稀释成1∶100，1∶200，1∶400，1∶800，1∶1600……(根据据抗1体的滴度而定)，分别加入反应孔中，每个稀释度二孔，每孔0.1ml，37℃孵育1小时后洗涤。然后加底物液，每孔0.1ml，37℃10～30分钟。以2M H２SO４ 0.05ml终止反应。$ J/ Aamp; ]3 Y: S

　　结果判定主要以ELISA比色仪读取各孔OD值。并以OD为纵座标，结合物浓度为横座标，绘制滴定曲线。由曲线上查得OD值为1.0左右，且曲线斜率***1大时的酶标抗1体稀释度，即为该标记物的工作浓度。

　　有关试验的***及器材均见ELISA部分。

要说明的是，本法为ELISA直接法，所测的工作浓度与在实际应用中的***适浓度可相差几个滴度。这就要求在建立ELISA实验系统中，因此基础上还应进一步确定实际工作浓度(可采用方阵法)，以达到***适的实验条件。