此IBL***盒能用于小鼠血1清，EDTA血浆，细胞上清中白介素-6的定量检测
***盒成分
1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG，亲合纯化 96T
2 酶标记抗1体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG，亲合纯化 0.4mL x 1
3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 E1IA缓冲液: 含1% BSA， 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5 标记抗1体稀释液: 含1% BSA， 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7 终止液: 1N*** 12mL x 1
8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA， 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但***盒没有提供) 酶1标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性***管(用于浓缩酶标记抗1体和显色剂)
3).丙1酮分级分离：将上清液倒入烧杯并置冰盐浴中，在不断搅拌下，用细滴管沿杯壁加入1倍体积预冷至－15℃的丙1酮，放置片刻，在冰冻离心机中以4000r/min离心15min，弃去沉淀。上清液再加入0.8体积(按原上清液体积)-15℃丙1酮，(操作同上)，瘦素elisa***盒，静置后，在冰冻离心机中离心收集沉淀。将沉淀溶于少量蒸馏水中，透析除去丙1酮。可得RZ值近于1的酶溶液。
4).精制：将上步酶液适当稀释，滴加1mol/L***锌溶液，使酶液中锌离子浓度为10 -3 mol/L，5 000r/min离心10min，得上清液。再将沉淀用少量蒸馏水洗涤，离心，洗液与清液合并，分装于透析袋内，用水透析除盐，用微孔滤膜过滤，进行真空冰冻干燥(约得20mg)，产品呈米***纤维状松软物，HRP产品的?RZ?值可达3.0左右，置真空干燥器中低温保存。? 3 y; ~/ O3 z Bamp; A1 d
由于辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase， HRP)比活性高，稳定，分子量小，纯酶容易制备，所以***1常用。HRP广泛分布于植物界，辣根中含量高，它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量18％。HRP由多个同功酶组成，分子量为40，000，等电点为PH3～9，酶催化的***适PH因供氢体不同而稍有差异，但多在PH5左右。酶溶于水和58％以下饱和度***铵溶液。HRP的辅基和酶蛋白***1大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm ／OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的纯度。高纯度的酶RZ值应在3.0左右(***1高可达3.4)。RZ值越小，非酶蛋白就越多。值得注意的是，纯度并不表示酶活性，如当酶变性后，RZ值仍可不变。* k4 |7 U# q# b% ^- t" ﹨
HRP的催化反应需要底物过氧1化氢(H2O2)和供氢体(DH2)。供氢体多为无色的还原型染料，通过反应可生成有色的氧化型染料(D)。酶促反应的过程如下:
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