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⑦切成的蜡带到20-750px长时,右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起,以免卷曲,并牵引成带,平放在蜡带盒上,靠刀面的一面较光滑,朝下,较皱的一面朝上。
⑧用单面刀片切取蜡片一小段,放在载玻上加水一滴,置于放大镜或显微镜下观察切片是否良好。
⑨切片工作结束后,应将切片刀取下用氯1仿擦去刀上沾着的石蜡,把切片机擦拭干净妥为保存。
9. 展片、贴片
打开水浴锅,使水温维持在40-45℃,另准备30%乙醇溶液。
② 切片时,将一碗30%乙醇溶液放于切片机旁的桌面上。
② 用小镊子夹取预先用刀片割开的蜡带,放在乙醇溶液的水面上,使切片展开。(可省)
③小镊子轻轻地将连在一起的切片分开,用一个载玻片将切片完整,已展开的切片捞至温水中,使之充分展开。
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3、染色弱 原因 解决办法 抗1体浓度过低,孵育时间过短 提高抗1体浓度,孵育时间不能少于60分钟 ***超过有效使用期 及时更换*** 操作中,滴加***时缓冲液未沥干,致 使***稀释 每步滴加***前沥干切片中多余的缓冲液(但防止切片干燥) 室温太低,白介素ELISA***盒供应商,低于15℃ 若室温低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分钟(或4℃冰 箱过夜) 蛋白封闭过度 封闭时间不要超过10分钟 4、染色阴性 原因 解决办法 操作步骤错误 重新试验,设立阳性对照 ***中无抗原 设立阳性对照片,以验证实验结果 一抗与二抗种属连接错误 仔细确定一抗与二抗种属无误
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但是这种特异性也不是绝1对的。假使两种化合物有着部分相同的结构,在抗原抗1体反应中可出现交叉反应。例如:绒毛膜促性1腺激1素(hCG)和黄体生成激1素(LH)均由α和β两个亚单位组成,其结构的不同处在β亚单位,而两者的α亚单位是同类的。用hCG***动物所得的抗血1清中含有抗α-hCG和抗β-hCG两种抗1体,抗α-hCG抗1体将与LH中的
α酶位发生交叉反应。在临床检验中,如用抗hCG抗血1清作为妊1娠诊1断***检定尿液中hCG,只能用于hCG浓度较高的试验,否则妇女生理性排泄入尿液中的微量LH将与之发生交叉反应。因此在作为早1孕诊断(敏感度应达到50mIu/mlhCG)的实际中必须应用只对hCG特异的抗β-hCG,以避免与其它激1素的交叉反应的发生。
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