




OPD底物显色一般在室外温或37℃反应20-30min后即不再加深,再延长反应时间,可使本底值增1高。OPD底物液受光照会自行变色,显色反应应避光进行,显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD产物用***终止后,显色由橙***转向棕***。
TMB受光照的影响不大,可在室温中置于操作台上,边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性,宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后,约40min显色达顶峰,随即逐渐减弱,至2小时后即可完全消退至无色。TMB的终止液有多种,叠氮钠和十二******钠(SDS)等酶***1剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24小时)不褪,是目视判断的良好终止剂。此外,各类酸性终止液则会使蓝色转变成***,此时可用特定的波长(450nm)测读吸光值。
安全性1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3. 不要用嘴吸取***盒里的任何成份。4. ***应按标签说明书储存,使用前***到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。5. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。6. 不用的其它***应包装好或盖好。不同批号的***不要混用。保质前使用。7. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀***盒里的各种成份及样品。9. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。10. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,***。实验完成后应立即读取OD值。11. 加入***的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
洗涤
洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗1体结合的物质,猪elisa***盒,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚本乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中,洗涤是主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严格按要求洗涤,不得马虎。
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