保温的方式除有的ELISA仪器附有特1制的电热块外，鱼ELISA***盒，一般均采用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度迅速平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，***后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。为避免酶标板底部受水汽或磨损导致的读数误差，一般采用鼓风恒温箱保温，这个过程必须在酶标板上方贴封纸，以免蒸发。无论是水浴还是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严格限制在规定的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证时间精1确，一个人一次不宜多于两块板同时操作、测定。
1．原理
辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase， HRP）
辣根过氧化物酶 (horse radish peroxidase，简称HRP，EC.1.11.1.7)是植物中研究得***深入的一种过氧化物酶，早在20世纪30年代就有人着手从辣根中分离此酶，以后又制备出结晶。本实验是以辣根为原料，经过水的抽提，***铵和丙1酮分级分离，再经锌离子纯化，透析除盐，冰冻干燥，便可得到高纯度的辣根过氧化物酶。
酶制剂及其底物
凡***性又能呈现有色化学反应的酶，原则上均可作为标记用。但作为标记抗1体用的酶应满足下列要求：3 D/ Y2 U# ~ S d( r* a" Z X8 g
(1)来源方便，易于纯化；
(2)比活性高，性质稳定；9 zamp; g$ X- l$ D) C9 r# U7 a0 C
(3)酶活性和量能 I w/ ^amp; O9 ]
用简单方法测定。目前在***酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和硷性磷酸酶(AP)，其次还有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。
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