植物elisa***盒-默沙克(图)

***匀浆液

1) 将***样本用PBS (0.01M， PH 7.4) 冲洗，洗去***表面残留的血液或杂质。

2) 将***块称重，记录后剪碎，碎块应尽量小，便于匀浆得更充分。

3) 将***按一定的比例加入预冷的PBS（临用前加入蛋白酶抑1制剂）匀浆，匀浆时置于冰上或冰浴中。（通常按***重量：PBS体积=1:9的比例匀浆，例如1g的***样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数）。

4) 吸取匀浆液到离心管，4℃5000×g 离心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

尿液、唾液等其他液体生物样本

1000×g离心20min，取上清即可检测。

总的来说，因为ELISA只能检测可溶性蛋白的含量，所以应保证所有样本均为澄清的液体，沉淀或悬浮物都应离心去除。

为了保证检测的准确性，保存于-20℃或-80℃的样本好在1~6个月内检测；4℃保存的样本应在1周内进行检测。

另外，植物elisa***盒，还应保证样本不含NaN3，因为NaN3会***HRP的活性，从而导致假阴性的结果。

洗涤

洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗1体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚本乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中，洗涤是主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。

（2） 包被抗1体（或抗原）的选择：将抗1体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响，一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的***适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值***1大而蛋白量***少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。（3）　酶标记抗1体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗1体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗1体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。