默沙克生物科技(多图)-大鼠elisa试剂盒生产

2).硫酸铵分级分离：在不断搅拌下，每1000mL滤液中慢慢加入226g硫酸铵粉末(相当于0.40饱和度，0℃)，大约在1~2h内加完，置冷室中放置过夜。次日将上清液小心地用虹吸管移出，下面混浊液以3 000r/min离心15min，弃沉淀，合并上清液。再按每1000mL上清液加258g硫酸铵粉末(0.8饱和度)随加随搅拌，当硫酸铵全部溶解后，置冷室过夜。次日，虹吸出上清液，沉淀部分在冰冻离心机中以13000r/min离心20min，弃去上清液，收集沉淀。将沉淀悬浮于100~150mL蒸馏水中(加水量要使沉淀全部溶解为止)，分装于透析袋内，放在流动自来水中进行透析1～2天，直到硫酸铵透析完毕为止(可用5%乙1酸钡溶液或奈氏试剂进行检查)。然后改换成用蒸馏水透析，中间更换2~3次，用0.1mol/L硝1酸银溶液检查透析外液无氯离子为止。将透析液合并，在冰冻离心机中以4 000r/min离心15min，弃去沉淀，量上清液的体积。

试剂的准备

按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液、洗涤液应用pH计测量。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用，大鼠elisa试剂盒生产，一般室温平衡不低于30min。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。

加样

在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。

加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样（一般不建议使用）。有些指标检测（如间接法ELISA）需用稀释的血1清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血1清标本，然后在微型震荡器上震荡1min。加酶结合物工作液和底物工作液时可用多道移液器，使加液过程在最1短时间内完成。

（2） 包被抗1体（或抗原）的选择：将抗1体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响，一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最1大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。（3）　酶标记抗1体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记抗1体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗1体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。