SensiQ是一系列以表面等离子共振(SPR)技术为基础的高性价比双通道生物传感系统。应用该系统,研究人员能够更为透彻地明瞭生物分子间相互作用的动力学和亲和性。这些相互作用的特性,对于***发明、细胞信号传导、***调控、***筛选等研究取得成果至关重要。SensiQ的问世,使得任何实验室都可以轻松地获得重要的生物分子间相互作用的动力学和亲和性数据。
由于目前普遍的SPR仪器价格昂贵,许多实验室没有能力拥有这种价值极高的设备。众多研究人员不得不依赖中心实验室或大型实验室进行动力学和亲和性的研究。
作为Sensata(原Texas Instruments)公司Spreeta产品的***新升级,SensiQ***整合了***的光学传导装置、精细的微射流系统、实时的参照减除功能、***的表面化学技术,以及直观的数据分析软件,***地展示出一系列性能价格比极高的生物传感系统,使得这种***的和实时的生物分子间相互作用分析应用在众多领域。
分析类型
- 亲和性、动力学、浓度检测、有效浓度检测、热动力学、结合计量、结合条件、相互作用机制、常规筛选、配体垂钓、表位测定、环境因素依赖性
应用类型
- 结合特异性、***选择、***发明、配体垂钓、细胞信号传导、***调控、亲和层析、结构-功能关系、小分子间相互作用
生物传感器和微射流系统
SensiQ的SPR生物传感器运用了Texas Instruments公司研发的光学传感器设计,以及Kretschmann SPR几何学构建,灵敏度高,光学静稳。生物传感器一次性使用,其羧基化表面适合于多种优化键合方案。生物传感器的安装快捷,几秒钟便可完成,使用也非常简便。功能化的生物传感器即便在储存一段时间后仍可继续使用。
SensiQ的双通道nL数量级的流动池设计,利于实时的参照曲线减除,并保证分析物在生物传感器的相互作用表面具有高传质性(Mass Transport)。***大地降低死体积和样品散射,对于真实的和量化的动力学和亲和性数据的获取至关重要。耐用的射流设计便于维修,明显减少了停机时间。
表面等离子共振技术
表面等离子共振(SPR)是一种光学现象,可被用来实时跟踪在天然状态下生物分子间的相互作用。这种方法对生物分子无任何损伤,且不需任何标记物。
先将一种生物分子(靶分子)键合在生物传感器表面,再将含有另一种能与靶分子产生相互作用的生物分子(分析物)的溶液注入并流经生物传感器表面。生物分子间的结合引起生物传感器表面质量的增加,导致折射指数按同样的比例增强,生物分子间反应的变化即被观察到。这种反应用反应单位(RU)来衡量:1 RU = 1pg 蛋白/mm2 = 1 x 10-6 RIU(折射指数单位)。
分析物在被注入的过程中,由对流和扩散流经相互作用表面而与靶分子形成复合物,导致分析物浓度改变。微射流系统内nL数量级流动池的应用,使得这种浓度的改变降至***低点,以确保高传质系数(Mass Transport Coefficient,km)。为保证分析物的传质性不被限制,键合在生物传感器表面的靶分子浓度必须较低。当分析物被注入时,分析物-靶分子复合物在生物传感器表面形成,导致反应增强。而当分析物被注入完毕后,分析物-靶分子复合物解离,导致反应减弱。通过结合式相互作用模型拟合这种反应曲线,动力学常数便可被确定。而非特异性结合和总折射指数移相等效应则可通过参照曲线减除法予以驱除。
亲和分子对
- 蛋白质–蛋白质、多肽–受体、***–抗原、膜受体–配体、凝集素–聚糖/糖蛋白、蛋白质–小分子、蛋白质–核酸、细胞–配体等
实验设计
任何一对亲和分子,一个(靶分子)被键合在生物传感器表面,另一个(分析物)被置于溶液中。当含有分析物的溶液流经靶分子键合的生物传感器表面时,亲和性复合物生成。
SensiQ配备双通道流动***分析式微射流系统,内有85nL流动池。SensiQ使用一次性的SPR生物传感器,装卸简便。生物传感器表面包被有单层的羧基化寡聚***(Carboxylated Oligoethyleneoxide)基质,可键合多种生物分子,并有效地阻止非特异性结合及变性。靶生物分子的这种既被键合在固相生物传感器表面,又存在于液相中的方式,增进了两种亲和分子间的接触性,同时避免了由于人为因素所造成的动力学分析的复杂化。
SensiQ备有多种键合方案用于改进实验设计,以支持生物分子的附着。***常用的偶联方式是用EDC/NHS进行胺偶联。其它键合方式,例如顺丁烯二酰***-硫醇(Maleimide-thiol),还原胺化,酰肼-醛(Hydrazide-aldehyde),亲和力捕获等,亦可使用。SensiQ双通道检测中的一个通道可用于生成适当的参照曲线。当表面化学物固定好以后,加入***多250 µl的样品,缓冲液流经生物传感器表面时产生稳定的基线。样品注入和计时通过自动化控制完成。通过实验设置向导功能,用户可记录多次***周期,并具备高重复性。
控制软件
SensiQ的控制软件在原始反应曲线生成时,同时并实时获取和展示两个通道内的数据。参照通道内的数据被减除,以补偿热漂移、非特异性结合、总折射指数移相等效应,从而得到清晰高质的实验数据。控制软件在反应曲线上简单加入报告点,用来确定样品注入后产生的结合反应。报告点的添加可在实验中的任何时候由人工进行,或由程序预设在固定的实验周期之中。列于表格中的所有报告点,连同相关的事件纪录,均有案可查。数据文件被储存后可被控制软件重新打开并编辑。
SensiQ控制软件的简单明了的用户界面,使得实验设计和进行***省时。实验向导功能简化设置过程,提高实验重复性。
QDATTM分析软件
反应曲线的分析以及其后的动力学和亲和性数据测算通常繁琐费时。SensiQ的QDATTM分析软件极大地简化了数据分析过程,为研究人员的动力学和亲和性测定提供了简单、省时、可信的手段。
QDATTM是在Biologic Software公司应用广泛的Clamp and Scrubber架构之上开发的***新一代分析软件,可在几分钟内成功分析采集到的高质量数据。QDATTM的简明友好界面带领用户通过一系列步骤,几秒钟内便完成信息的测算。QDATTM的模型拟合运用数字整合及优化的曲线拟合算法,迅速地估算***佳拟合参数值,确保相互作用模型和数据集的拟合,以测定动力学和亲和性常数,以及浓度分析。QDATTM同时提供了简单残差图和残差标准差,用来定量评估拟合的程度。QDATTM的动力学拟合模型包括准一级结合模型(Pseudo-first-order Binding Model)和准一级传质结合模型(Pseudo-first-order Binding Model with Mass Transport)。
SensiQ Discovery技术参数和检测范围
技术参数
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流动池数量
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2
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流动池选择
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1,或2,或1和2
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流动池面积
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2.2mm2
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流动池容积
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85nL(高传质率)
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样品加入
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手动(***器)
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样品注入
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人工电脑控制
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样品双通道同时注入
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是
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样品注入体积
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10 – 250μL
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样品注入泵
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外接式
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样品流动速率
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自定(< 250 µl/分)
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内部死体积
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< 1.5μL
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实时参照曲线减除
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是
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折射指数范围
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1.33 – 1.40
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短期背景噪音
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< 1RU
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长期背景噪音
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< 0.30RU/分(当环境变化 < 3°C/小时)
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温度控制
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室温
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尺寸
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宽22.9 X 高15.2 X 长27.9cm
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重量
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3.6kg
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电源
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100 – 240V,50/60Hz
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检测范围
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分子量低限
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< 250Da
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ka(结合速率常数)
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1 x 107M–1s–1
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kd(解离速率常数)
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10–6 – 10–1s–1
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KD(kd / ka)
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10–4 – 10–10M
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浓度
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< 10–10 – 10–3M
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